Hauv kev tshawb fawb no, cov teebmeem stimulatory ntawm kev kho mob ua ke ntawmcov tshuaj tswj kev loj hlob ntawm cov nroj tsuag(2,4-D thiab kinetin) thiab hlau oxide nanoparticles (Fe₃O₄-NPs) ntawm in vitro morphogenesis thiab secondary metabolite ntau lawm hauv *Hypericum perforatum* L. tau raug tshawb xyuas. Kev kho mob zoo tshaj plaws [2,4-D (0.5 mg/L) + kinetin (2 mg/L) + Fe₃O₄-NPs (4 mg/L)] tau txhim kho cov kev loj hlob ntawm cov nroj tsuag: qhov siab ntawm cov nroj tsuag nce 59.6%, qhov ntev ntawm cov hauv paus hniav nce 114.0%, tus lej ntawm cov paj tawg nce 180.0%, thiab qhov hnyav ntawm callus tshiab nce 198.3% piv rau pawg tswj. Kev kho mob ua ke no kuj tau txhim kho kev ua haujlwm rov ua dua tshiab (50.85%) thiab nce cov ntsiab lus hypericin nce 66.6%. Kev tshuaj xyuas GC-MS qhia tau tias muaj cov ntsiab lus siab ntawm hyperoside, β-patholene, thiab cetyl cawv, suav txog 93.36% ntawm tag nrho thaj chaw siab tshaj plaws, thaum cov ntsiab lus ntawm tag nrho cov phenolics thiab flavonoids nce ntxiv txog li 80.1%. Cov txiaj ntsig no qhia tau tias cov nroj tsuag loj hlob regulators (PGRs) thiab Fe₃O₄ nanoparticles (Fe₃O₄-NPs) ua rau muaj kev cuam tshuam synergistic los ntawm kev txhawb nqa organogenesis thiab kev sib sau ua ke ntawm cov tshuaj bioactive, uas sawv cev rau lub tswv yim zoo rau kev txhim kho biotechnological ntawm cov nroj tsuag tshuaj.
St. John's wort (Hypericum perforatum L.), tseem hu ua St. John's wort, yog ib tsob nroj uas muaj hnub nyoog ntev ntawm tsev neeg Hypericaceae uas muaj txiaj ntsig zoo rau kev lag luam. [1] Nws cov khoom xyaw bioactive muaj xws li cov tannins ntuj, xanthones, phloroglucinol, naphthalenedianthrone (hyperin thiab pseudohyperin), flavonoids, phenolic acids, thiab cov roj tseem ceeb. [2,3,4] St. John's wort tuaj yeem nthuav tawm los ntawm cov txheej txheem ib txwm muaj; txawm li cas los xij, lub caij nyoog ntawm cov txheej txheem ib txwm muaj, kev tawg noob tsawg, thiab kev cuam tshuam rau cov kab mob txwv nws lub peev xwm rau kev cog qoob loo loj thiab kev tsim cov metabolites theem nrab. [1,5,6]
Yog li, kev cog qoob loo hauv vitro yog suav hais tias yog ib txoj hauv kev zoo rau kev cog qoob loo sai, kev txuag cov peev txheej germplasm, thiab kev nce ntxiv ntawm cov tshuaj kho mob [7, 8]. Cov tshuaj tswj kev loj hlob ntawm cov nroj tsuag (PGRs) ua lub luag haujlwm tseem ceeb hauv kev tswj hwm morphogenesis thiab tsim nyog rau kev cog qoob loo hauv vitro ntawm callus thiab tag nrho cov kab mob. Kev ua kom zoo ntawm lawv cov concentration thiab kev sib xyaw ua ke yog qhov tseem ceeb rau kev ua tiav ntawm cov txheej txheem kev loj hlob no [9]. Yog li ntawd, kev nkag siab txog cov khoom sib xyaw thiab kev sib xyaw ua ke ntawm cov tshuaj tswj hwm yog qhov tseem ceeb rau kev txhim kho kev loj hlob thiab kev muaj peev xwm rov ua dua tshiab ntawm St. John's wort (H. perforatum) [10].
Cov nanoparticles hlau oxide (Fe₃O₄) yog ib chav kawm ntawm cov nanoparticles uas tau lossis tab tom tsim rau kev cog qoob loo ntawm cov ntaub so ntswg. Fe₃O₄ muaj cov khoom sib nqus tseem ceeb, kev sib raug zoo ntawm biocompatibility, thiab lub peev xwm los txhawb kev loj hlob ntawm cov nroj tsuag thiab txo qhov kev ntxhov siab ntawm ib puag ncig, yog li nws tau nyiam qhov kev saib xyuas ntau hauv kev tsim cov ntaub so ntswg. Cov kev siv tau ntawm cov nanoparticles no yuav suav nrog kev ua kom zoo dua hauv vitro kab lis kev cai los txhawb kev faib cell, txhim kho kev nqus cov as-ham, thiab ua kom cov enzymes antioxidant ua haujlwm [11].
Txawm hais tias cov nanoparticles tau qhia txog cov txiaj ntsig zoo rau kev loj hlob ntawm cov nroj tsuag, kev tshawb fawb txog kev siv ua ke ntawm Fe₃O₄ nanoparticles thiab cov tshuaj tswj kev loj hlob ntawm cov nroj tsuag hauv *H. perforatum* tseem tsawg heev. Txhawm rau kom tiav qhov kev paub no, kev tshawb fawb no tau soj ntsuam cov teebmeem ntawm lawv cov teebmeem ua ke ntawm kev hloov pauv hauv vitro thiab kev tsim cov metabolite theem ob los muab cov kev nkag siab tshiab rau kev txhim kho cov yam ntxwv ntawm cov nroj tsuag tshuaj. Yog li ntawd, kev tshawb fawb no muaj ob lub hom phiaj: (1) ua kom zoo dua qhov kev sib sau ua ke ntawm cov tshuaj tswj kev loj hlob ntawm cov nroj tsuag kom txhawb nqa kev tsim callus, kev rov ua dua tshiab ntawm cov tua, thiab kev cag hauv vitro; thiab (2) soj ntsuam cov teebmeem ntawm Fe₃O₄ nanoparticles ntawm cov kev loj hlob hauv vitro. Cov phiaj xwm yav tom ntej suav nrog kev soj ntsuam tus nqi ciaj sia ntawm cov nroj tsuag rov ua dua tshiab thaum lub sijhawm acclimatization (hauv vitro). Nws xav tias cov txiaj ntsig ntawm kev tshawb fawb no yuav txhim kho qhov ua tau zoo ntawm micropropagation ntawm *H. perforatum*, yog li pab txhawb rau kev siv ruaj khov thiab kev siv biotechnological ntawm cov nroj tsuag tshuaj tseem ceeb no.
Hauv kev tshawb fawb no, peb tau txais cov nplooj tawm los ntawm cov nroj tsuag St. John's wort txhua xyoo uas cog hauv daim teb (cov nroj tsuag niam). Cov nplooj tawm no tau siv los ua kom zoo dua qub hauv cov kab lis kev cai hauv vitro. Ua ntej cog, cov nplooj tau ntxuav kom huv si hauv qab dej ntws rau ob peb feeb. Tom qab ntawd cov nplaim ntawm cov nroj tsuag tau tua kab mob los ntawm kev muab tso rau hauv 70% ethanol rau 30 vib nas this, tom qab ntawd muab tso rau hauv 1.5% sodium hypochlorite (NaOCl) kua uas muaj ob peb tee ntawm Tween 20 rau 10 feeb. Thaum kawg, cov nroj tsuag tau ntxuav peb zaug nrog dej ntshiab ua ntej hloov mus rau qhov chaw cog kab lis kev cai tom ntej.
Tau plaub lub lis piam tom ntej no, cov kev ntsuas rov qab los ntawm cov ceg tau raug ntsuas, suav nrog qhov nrawm ntawm kev rov qab los, tus lej ntawm cov ceg ib tsob ntoo, thiab qhov ntev ntawm cov ceg. Thaum cov ceg rov qab los txog qhov ntev tsawg kawg yog 2 cm, lawv tau raug xa mus rau hauv cov hauv paus uas muaj cov tshuaj MS ib nrab zog, 0.5 mg/L indolebutyric acid (IBA), thiab 0.3% guar gum. Kev cog cov hauv paus txuas ntxiv mus rau peb lub lis piam, thaum lub sijhawm ntawd qhov nrawm ntawm kev cog cov hauv paus, tus lej ntawm cov hauv paus, thiab qhov ntev ntawm cov hauv paus tau raug ntsuas. Txhua qhov kev kho mob tau rov ua dua peb zaug, nrog rau 10 tsob ntoo cog rau ib qho kev rov ua dua, ua rau muaj kwv yees li 30 tsob ntoo cog rau ib qho kev kho mob.
Qhov siab ntawm cov nroj tsuag tau ntsuas hauv centimeters (cm) siv tus pas ntsuas, txij ntawm lub hauv paus ntawm cov nroj tsuag mus rau qhov kawg ntawm nplooj siab tshaj plaws. Qhov ntev ntawm cov cag tau ntsuas hauv millimeters (mm) tam sim ntawd tom qab ua tib zoo tshem cov noob cog thiab tshem cov khoom cog. Tus naj npawb ntawm cov paj ib tsob nroj tau suav ncaj qha rau ntawm txhua tsob nroj. Tus naj npawb ntawm cov pob dub ntawm nplooj, hu ua nodules, tau ntsuas los ntawm kev pom. Cov nodules dub no ntseeg tau tias yog cov qog uas muaj hypericin, lossis cov pob oxidative, thiab siv ua qhov qhia txog kev ua haujlwm ntawm cov nroj tsuag teb rau kev kho mob. Tom qab tshem tawm tag nrho cov khoom cog, qhov hnyav tshiab ntawm cov noob cog tau ntsuas siv lub tshuab hluav taws xob nrog qhov tseeb ntawm milligrams (mg).
Txoj kev xam tus nqi ntawm kev tsim callus yog raws li nram no: tom qab cog cov nroj tsuag hauv ib qho chaw uas muaj ntau yam kev tswj hwm kev loj hlob (kinases, 2,4-D, thiab Fe3O4) rau plaub lub lis piam, tus naj npawb ntawm cov nroj tsuag uas muaj peev xwm tsim callus raug suav. Cov mis rau kev xam tus nqi ntawm kev tsim callus yog raws li nram no:
Txhua txoj kev kho mob tau rov ua dua peb zaug, nrog tsawg kawg 10 qhov kev tshuaj xyuas hauv txhua qhov kev rov ua dua.
Tus nqi rov tsim dua qhia txog feem pua ntawm cov ntaub so ntswg callus uas ua tiav cov txheej txheem sib txawv ntawm cov paj tom qab theem tsim callus. Qhov ntsuas no qhia txog lub peev xwm ntawm cov ntaub so ntswg callus los hloov mus ua cov ntaub so ntswg sib txawv thiab loj hlob mus ua cov kab mob tshiab ntawm cov nroj tsuag.
Tus coefficient ntawm kev cog cag yog qhov sib piv ntawm tus naj npawb ntawm cov ceg uas muaj peev xwm cog tau rau tag nrho cov ceg. Qhov cim qhia no qhia txog kev vam meej ntawm theem kev cog cag, uas yog qhov tseem ceeb hauv kev cog me me thiab kev nthuav dav ntawm cov nroj tsuag, vim tias kev cog cag zoo pab cov noob cog kom muaj sia nyob zoo dua hauv cov xwm txheej loj hlob.
Cov tshuaj hypericin tau rho tawm nrog 90% methanol. Tsib caug mg ntawm cov khoom siv cog qhuav tau ntxiv rau 1 ml ntawm methanol thiab sonicated rau 20 feeb ntawm 30 kHz hauv lub tshuab ntxuav ultrasonic (qauv A5120-3YJ) ntawm chav tsev kub hauv qhov tsaus ntuj. Tom qab sonication, cov qauv tau centrifuged ntawm 6000 rpm rau 15 feeb. Cov supernatant tau sau, thiab qhov absorbance ntawm hypericin tau ntsuas ntawm 592 nm siv Plus-3000 S spectrophotometer raws li txoj kev piav qhia los ntawm Conceiçao et al. [14].
Feem ntau cov kev kho mob nrog cov tshuaj tswj kev loj hlob ntawm cov nroj tsuag (PGRs) thiab cov hlau oxide nanoparticles (Fe₃O₄-NPs) tsis tau ua rau muaj cov pob dub ntawm cov nplooj tua rov qab. Tsis muaj cov pob tau pom hauv ib qho kev kho mob nrog 0.5 lossis 1 mg / L 2,4-D, 0.5 lossis 1 mg / L kinetin, lossis 1, 2, lossis 4 mg / L hlau oxide nanoparticles. Ob peb qhov kev sib xyaw ua ke tau qhia txog kev nce me ntsis hauv kev loj hlob ntawm cov pob (tab sis tsis tseem ceeb) ntawm cov concentration ntawm kinetin thiab / lossis hlau oxide nanoparticles ntau dua, xws li kev sib xyaw ua ke ntawm 2,4-D (0.5–2 mg / L) nrog kinetin (1–1.5 mg / L) thiab hlau oxide nanoparticles (2–4 mg / L). Cov txiaj ntsig no tau pom hauv Daim Duab 2. Cov pob dub sawv cev rau cov qog hypericin-nplua nuj, ob qho tib si tshwm sim ntuj thiab muaj txiaj ntsig. Hauv kev tshawb fawb no, cov pob dub feem ntau yog txuam nrog kev xim av ntawm cov ntaub so ntswg, qhia txog ib puag ncig zoo rau kev sib sau ua ke ntawm hypericin. Kev kho mob nrog 2,4-D, kinetin, thiab Fe₃O₄ nanoparticles txhawb kev loj hlob ntawm callus, txo qhov xim av, thiab nce cov ntsiab lus chlorophyll, qhia txog kev ua haujlwm metabolic zoo dua thiab kev txo qis ntawm kev puas tsuaj oxidative [37]. Kev tshawb fawb no tau soj ntsuam cov teebmeem ntawm kinetin ua ke nrog 2,4-D thiab Fe₃O₄ nanoparticles ntawm kev loj hlob thiab kev txhim kho ntawm St. John's wort callus (Daim duab 3a-g). Cov kev tshawb fawb yav dhau los tau qhia tias Fe₃O₄ nanoparticles muaj cov haujlwm antifungal thiab antimicrobial [38, 39] thiab, thaum siv ua ke nrog cov nroj tsuag loj hlob, tuaj yeem txhawb cov txheej txheem tiv thaiv ntawm cov nroj tsuag thiab txo cov ntsuas kev ntxhov siab ntawm tes [18]. Txawm hais tias biosynthesis ntawm cov metabolites theem nrab yog tswj hwm los ntawm noob caj noob ces, lawv cov txiaj ntsig tiag tiag yog nyob ntawm cov xwm txheej ib puag ncig. Kev hloov pauv metabolic thiab morphological tuaj yeem cuam tshuam rau cov theem metabolite theem nrab los ntawm kev tswj hwm kev qhia tawm ntawm cov noob tshwj xeeb ntawm cov nroj tsuag thiab teb rau cov yam ntxwv ib puag ncig. Ntxiv mus, cov inducers tuaj yeem ua rau muaj kev ua haujlwm ntawm cov noob tshiab, uas ua rau muaj kev ua haujlwm enzymatic, thaum kawg ua rau muaj ntau txoj hauv kev biosynthetic thiab ua rau muaj cov metabolites theem ob. Ntxiv mus, lwm txoj kev tshawb fawb tau qhia tias kev txo qhov ntxoov ntxoo ua rau muaj kev raug tshav ntuj ntau ntxiv, yog li ua rau muaj qhov kub thiab txias thaum nruab hnub hauv qhov chaw nyob ntuj ntawm *Hypericum perforatum*, uas kuj pab txhawb rau kev nce ntxiv ntawm hypericin. Raws li cov ntaub ntawv no, txoj kev tshawb fawb no tau tshawb nrhiav lub luag haujlwm ntawm cov hlau nanoparticles ua cov inducers muaj peev xwm hauv kev cog qoob loo ntawm cov ntaub so ntswg. Cov txiaj ntsig tau qhia tias cov nanoparticles no tuaj yeem ua rau cov noob koom nrog hauv hesperidin biosynthesis los ntawm kev txhawb nqa enzymatic, ua rau muaj kev sib sau ua ke ntawm cov tshuaj no (Daim Duab 2). Yog li ntawd, piv rau cov nroj tsuag loj hlob nyob rau hauv cov xwm txheej ntuj, nws tuaj yeem sib cav tias kev tsim cov tshuaj no hauv vivo kuj tseem tuaj yeem txhim kho thaum muaj kev ntxhov siab nruab nrab ua ke nrog kev ua haujlwm ntawm cov noob koom nrog hauv biosynthesis ntawm cov metabolites theem ob. Kev kho mob sib xyaw ua ke feem ntau muaj txiaj ntsig zoo rau tus nqi rov ua dua tshiab, tab sis qee zaum, cov nyhuv no tsis muaj zog. Qhov tseem ceeb, kev kho mob nrog 1 mg / L 2,4-D, 1.5 mg / L kinase, thiab ntau yam kev sib xyaw ua ke tuaj yeem ua rau tus nqi rov ua dua tshiab ntawm 50.85% piv rau pawg tswj (Daim duab 4c). Cov txiaj ntsig no qhia tau hais tias kev sib xyaw ua ke ntawm nanohormones tuaj yeem ua haujlwm synergistically los txhawb kev loj hlob ntawm cov nroj tsuag thiab kev tsim cov metabolite, uas yog qhov tseem ceeb heev rau kev cog qoob loo ntawm cov nroj tsuag tshuaj. Palmer thiab Keller [50] tau qhia tias kev kho mob 2,4-D tuaj yeem ua rau muaj callus tsim hauv St. perforatum, thaum ntxiv kinase ua rau muaj callus tsim thiab rov ua dua tshiab. Cov nyhuv no yog vim muaj kev txhim kho ntawm kev sib npaug ntawm cov tshuaj hormones thiab kev txhawb nqa ntawm kev faib cell. Bal et al. [51] pom tias kev kho mob Fe₃O₄-NP tuaj yeem txhim kho kev ua haujlwm ntawm cov enzymes antioxidant, yog li txhawb kev loj hlob ntawm cov hauv paus hniav hauv St. perforatum. Cov kab lis kev cai uas muaj Fe₃O₄ nanoparticles ntawm cov concentration ntawm 0.5 mg / L, 1 mg / L, thiab 1.5 mg / L txhim kho qhov kev rov ua dua tshiab ntawm cov nroj tsuag flax [52]. Kev siv kinetin, 2,4-dichlorobenzothiazolinone, thiab Fe₃O₄ nanoparticles tau txhim kho qhov callus thiab cov hauv paus tsim cov nqi, txawm li cas los xij, cov kev phiv tshwm sim ntawm kev siv cov tshuaj hormones no rau kev rov ua dua tshiab hauv vitro yuav tsum tau txiav txim siab. Piv txwv li, kev siv sijhawm ntev lossis siab ntawm 2,4-dichlorobenzothiazolinone lossis kinetin yuav ua rau muaj kev hloov pauv ntawm somatic clonal, kev ntxhov siab oxidative, cov qauv callus tsis zoo, lossis vitrification. Yog li ntawd, qhov kev rov ua dua tshiab siab tsis tas yuav kwv yees qhov ruaj khov ntawm cov noob caj noob ces. Txhua cov nroj tsuag rov ua dua tshiab yuav tsum tau soj ntsuam siv cov cim molecular (piv txwv li RAPD, ISSR, AFLP) lossis kev tshuaj xyuas cytogenetic los txiav txim siab lawv qhov sib xws thiab kev zoo sib xws rau cov nroj tsuag hauv vivo [53,54,55].
Txoj kev tshawb fawb no tau ua pov thawj thawj zaug tias kev siv cov tshuaj tswj kev loj hlob ntawm cov nroj tsuag (2,4-D thiab kinetin) nrog Fe₃O₄ nanoparticles ua ke tuaj yeem txhim kho morphogenesis thiab kev sib sau ua ke ntawm cov metabolites tseem ceeb (xws li hypericin thiab hyperoside) hauv *Hypericum perforatum*. Txoj kev kho mob zoo tshaj plaws (1 mg/L 2,4-D + 1 mg/L kinetin + 4 mg/L Fe₃O₄-NPs) tsis yog tsuas yog ua kom muaj callus ntau tshaj plaws, organogenesis, thiab cov metabolite theem nrab xwb tab sis kuj tau ua pov thawj tias muaj txiaj ntsig zoo, uas yuav ua rau cov nroj tsuag tiv taus kev ntxhov siab thiab muaj txiaj ntsig zoo rau kev kho mob. Kev sib xyaw ua ke ntawm nanotechnology thiab cov nroj tsuag cov ntaub so ntswg muab lub platform ruaj khov thiab ua haujlwm tau zoo rau kev tsim cov tshuaj hauv vitro loj. Cov txiaj ntsig no ua rau muaj kev siv rau kev lag luam thiab kev tshawb fawb yav tom ntej txog cov txheej txheem molecular, kev kho kom zoo dua qub thiab kev ua haujlwm ntawm cov noob caj noob ces, yog li txuas cov kev tshawb fawb tseem ceeb ntawm cov nroj tsuag tshuaj nrog cov thev naus laus zis siv tau.
Lub sijhawm tshaj tawm: Lub Kaum Ob Hlis-12-2025